Набор для ПЦР у рэжыме рэальнага часу на вірус Monkeypox
Дэталі прадукту
Меркаванае выкарыстанне
Ён выкарыстоўваецца для выяўлення віруса воспы малпаў у сыроватцы крыві чалавека або ўзорах экссудата паразы з дапамогай сістэм ПЦР у рэальным часе.
Прынцып тэсту
Гэты прадукт уяўляе сабой сістэму ПЦР у рэжыме рэальнага часу Taqman® на аснове флуарэсцэнтнага зонда.Спецыфічныя праймеры і зонды распрацаваны для выяўлення гена F3L віруса воспы малпаў.Унутраны кантроль, арыентаваны на кансерватыўны ген чалавека, кантралюе збор узораў, апрацоўку ўзораў і працэс ПЦР у рэальным часе, каб пазбегнуць прытворнаадмоўных вынікаў.Набор уяўляе сабой цалкам падрыхтаваную ліафілізаваную сістэму, якая ўключае матэрыялы, неабходныя для выяўлення віруса воспы малпаў: фермент ампліфікацыі нуклеінавай кіслаты, фермент UDG, рэакцыйны буфер, спецыфічны праймер і зонд.
Асноўны змест
Прадстаўленыя кампаненты пералічаны ў табліцы.
| Кампаненты | Пакет | Інгрэдыент |
| Вірус воспы малпаўЛиофилизированный прэмікс | 8 прабірак для ПЦР з палоскамі× 6 пакуначкаў | Праймеры, зонды, сумесь dNTP/dUTP, Mg2+, ДНК-палімераза Taq, фермент UDG |
| MPV станоўчы кантроль | 400 мкл × 1 прабірка | Паслядоўнасці ДНК, якія змяшчаюць мэтавы ген |
| MPV адмоўны кантроль | 400 мкл × 1 прабірка | Паслядоўнасці ДНК, якія змяшчаюць сегмент гена чалавека |
| Растваральны раствор | 1 мл × 1 цюбік | Стабілізатар |
| Сертыфікат адпаведнасці | 1 шт | / |
Аперацыя Flow
1. УзорКалекцыя:Узор неабходна сабраць у стэрыльныя прабіркі ў адпаведнасці з
са стандартнымі тэхнічнымі характарыстыкамі.
2. Падрыхтоўка рэагентаў (зона падрыхтоўкі рэагентаў)
Дастаньце кампаненты набору, збалансуйце іх пры пакаёвай тэмпературы для выкарыстання ў рэжыме чакання.
3. Апрацоўка ўзораў (зона апрацоўкі ўзораў)
3.1 Вылучэнне нуклеінавых кіслот
Рэкамендуецца ўзяць 200 мкл вадкіх узораў, станоўчага і адмоўнага кантролю для экстракцыі нуклеінавых кіслот у адпаведнасці з адпаведнымі патрабаваннямі і працэдурамі набораў для экстракцыі віруснай ДНК.
3.2 Растварэнне ліяфілізаванага парашка і даданне шаблону
Прыгатуйце ліяфілізаваны прэмікс з вірусам воспы малпаў у адпаведнасці з колькасцю пробаў.Для аднаго ўзору патрэбна адна прабірка для ПЦР, якая змяшчае ліяфілізаваны парашок папярэдняй сумесі.Адмоўны і станоўчы кантроль трэба разглядаць як два ўзору.
(1) Дадайце 15 мкл растваральнага раствора ў кожную прабірку для ПЦР, якая змяшчае ліяфілізаваны прэмікс, затым дадайце 5 мкл экстрагаваных узораў/адмоўнага кантролю/станоўчага кантролю ў кожную прабірку для ПЦР адпаведна.
(2) Шчыльна накрыйце прабіркі для ПЦР, рухайце прабіркі для ПЦР уручную, пакуль ліяфілізаваны парашок цалкам не растворыцца і не змяшаецца, збярыце вадкасць на дно прабірак для ПЦР імгненным нізкахуткасным цэнтрыфугаваннем.
(3) Калі для выяўлення выкарыстоўваецца звычайны ПЦР-прыбор у рэжыме рэальнага часу, перанясіце прабіркі для ПЦР непасрэдна ў зону ампліфікацыі;калі для дэтэкцыі выкарыстоўваецца BTK-8, неабходна выканаць наступныя аперацыі: перанесці 10 мкл вадкасці з прабіркі для ПЦР у лунку рэакцыйнага чыпа BTK-8.Адна прабірка ПЦР адпавядае адной лунцы на чыпе.Падчас піпеткі пераканайцеся, што піпетка знаходзіцца пад вуглом 90 градусаў па вертыкалі.Наканечнікі аэразольных бар'ерных піпетак трэба размясціць у цэнтры лункі з умеранай сілай і спыніць націск на піпетку, калі яна дасягне першай перадачы (каб пазбегнуць бурбалак).Пасля запаўнення лунак дастаньце мембрану рэакцыйнага чыпа, каб пакрыць усе лункі, а затым чып перанясіце ў зону выяўлення ампліфікацыі.
4. ПЦР-ампліфікацыя (вобласць выяўлення)
4.1 Змесціце прабіркі для ПЦР/рэакцыйны чып у рэакцыйны бак і ўстаўце назвы кожнай рэакцыйнай лункі ў адпаведным парадку.
4.2 Налады выяўлення флуарэсцэнцыі: (1) вірус воспы малпаў (FAM);(2) Унутраны кантроль (CY5).
4.3 Выканайце наступны цыклічны пратакол
Пратакол ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| крокі | тэмпература | Час | Цыклы | |
| 1 | Папярэдняя дэнатурацыя | 95 ℃ | 2 хвіліны | 1 |
| 2 | Дэнатурацыя | 95 ℃ | 10 с | 45 |
| Адпал, падаўжэнне, набыццё флуарэсцэнцыі | 60 ℃ | 30 с | ||
Пратакол БТК-8:
| крокі | тэмпература | Час | Цыклы | |
| 1 | Папярэдняя дэнатурацыя | 95 ℃ | 2 хвіліны | 1 |
| 2 | Дэнатурацыя | 95 ℃ | 5 с | 45 |
| Адпал, падаўжэнне, набыццё флуарэсцэнцыі | 60 ℃ | 14 с | ||
5. Аналіз вынікаў (звярніцеся да Кіраўніцтва карыстальніка прыбора)
Пасля рэакцыі вынікі будуць захаваны аўтаматычна.Націсніце «Аналіз», каб прааналізаваць, і прыбор аўтаматычна інтэрпрэтуе значэнні Ct кожнага ўзору ў слупку вынікаў.Адмоўны і станоўчы вынікі кантролю павінны адпавядаць наступнаму "6. Кантроль якасці".
6. Кантроль якасці
6.1 Адмоўны кантроль: няма Ct або Ct>40 у канале FAM, Ct≤40 у канале CY5 з нармальнай крывой ампліфікацыі.
6.2 Станоўчы кантроль: Ct≤35 у канале FAM з нармальнай крывой ампліфікацыі, Ct≤40 у канале CY5 з нармальнай крывой ампліфікацыі.
6.3 Вынік лічыцца сапраўдным, калі выкананы ўсе вышэйпералічаныя крытэрыі.У адваротным выпадку вынік несапраўдны.
Інтэрпрэтацыя вынікаў
Магчымыя наступныя вынікі:
| Значэнне Ct канала FAM | Значэнне Ct канала CY5 | Інтэрпрэтацыя | |
| 1# | Няма Ct або Ct>40 | ≤40 | Вірус воспы малпаў адмоўны |
| 2# | ≤40 | Любыя вынікі | Станоўчы вірус воспы малпаў |
| 3# | 40～45 | ≤40 | Паўторны тэст;калі ўсё яшчэ 40~45, паведаміце як 1# |
| 4# | Няма Ct або Ct>40 | Няма Ct або Ct>40 | Несапраўдны |
НАТАТКА: Калі вынік несапраўдны, узор неабходна сабраць і праверыць яшчэ раз.
Інфармацыя аб замове
| Назва прадукту | кот.няма | Памер | Узор | Тэрмін прыдатнасці | Пер.& Sto.тэмп. |
| Набор для ПЦР у рэжыме рэальнага часу на вірус Monkeypox | B001P-01 | 48 тэстаў/камплект | Сыроватка/эксудат паразы | 12 месяцаў | -25～-15℃ |
